流式细胞术在血液学中的应用

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髓过氧化物酶〔MPO〕是一种血红蛋白，它由两条 53 kDa 重链和两条 15 kDa 轻链组成，其分子量为

140 kD。每一个 MPO 分子包含两个起催化作用的非朊基卟啉。

MPO 储藏于中性粒细胞的嗜天青颗粒中。MPO 是中性粒细胞杀菌系统中的主要成分，它能催化氯

离子〔Cl-〕和过氧化氢〔H2O2〕生成强氧化剂次氯酸〔HOCl〕。在许多炎症反响中，MPO 被释放到细

胞外，作为反映中性粒细胞活性的一个指标。激活的白细胞分泌 MPO，其产生的过氧化物在宿主防御中

起重要作用。MPO 与动脉粥样硬化等心血管疾病密切相关， MPO 影响粥样斑块稳定性及血栓形成，

MPO 促进氧化脂类〔具细胞毒及促凝血作用〕产生，同时耗竭 NO 引起血管收缩。

激活白细胞释放的 MPO，在敏感的斑块中高表达并且具有催化活性，被认为是影响斑块的稳定性的

一个重要因素。MPO 可作为预测急性冠脉综合症〔ACS〕指标。

血浆 MPO 水平可以在不考虑 C反响蛋白及其它的炎症标志物的情况下独立预测心血管疾病的危险性，

血浆 MPO 水平可以预测急性局部胸痛病人 6个月内患心肌堵塞及其他严重心血管疾病的危险性。更重要

的是，对于肌钙蛋白 I〔Troponin I〕及肌钙蛋白 T〔Troponin T〕等经典检测排除心梗的患者，检测 MPO

水平可以预测这些病人发生心梗等严重心血管疾病的危险性。

单一的血浆 MPO 检测能独立预测早期心肌堵塞的危险性，及在随后的 1至6个月内发生严重心血管

疾病的危险性。与检测 Troponin I、Troponin T、CK-MB、C反响蛋白水平不同，MPO 检测可预测无心肌

坏死的患者发生严重心血管事件的危险性，突出了它在预测胸痛病人出现心梗危险性的潜在作用。

一、流式细胞术在根底血液学中的应用

〔一〕血细胞的计数和分类研究

ÝÝÝ 1．红细胞的计数、分类及其功能的研究

ÝÝ 〔1〕循环的红细胞总量的测定：

ÝÝÝ 生物素—逆转抗生物素蛋白—FITC 系统的特异性和流式细胞Ý 仪〔FCM〕的敏感

性结合起来，建立了 FCM 测定人红细胞总量的方法，此方法具有标本用量少，无放射性的

优点，适用于儿童和孕妇测定循环红细胞总量。

ÝÝ 〔2〕网织红细胞总数：

ÝÝÝ 外周血网织红细胞计数〔百分数和绝对值〕是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。

许多学者先后提出应用 FCM 和不同的 RNA 特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如

派假设宁 Y、AO、溴化乙啶、thiazoleÝ orange 等。

ÝÝÝ 目前最普遍应用的是Ý thiazoie　orangeÝ 染色法，这种特异性 RNAÝ 的激发

波〔488nm〕测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值，

而且还能获得网织红细胞成熟指数〔RMI〕。RMI 是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，

它与网织红细胞内 RNA 含量成正比，RMI 可成功地用于评价骨髓移植的效果。

ÝÝÝ 目前，FCM 检测网织红细胞主要用于

ÝÝÝÝÝ 1〕预测骨髓移植的效果；

ÝÝÝÝÝ 2〕解释各种红系增长低下性贫血的发病原因;

ÝÝÝÝÝ 3〕评价某些新的重组生物制剂的治疗效果。

ÝÝÝ 2．白细胞计数、分类及其功能的研究

ÝÝ 〔1〕白细胞计数和分类

ÝÝÝ FCM 方法防止常规染色过程中，由于细胞漂洗和分类溶解所致的人工假象，提供了

可靠的评价血液状态的第一手资料，并进一步筛选细胞亚群、测定其他参数。LDS-

751、CD45、thiazoleÝ orange

ÝÝ 〔2〕中性粒细胞的功能

ÝÝÝ FCM 可在单个细胞水平上定量测定中性粒细胞的功能变化，有助于了解白细胞在感

染性疾病、自身免疫性疾病、恶性疾病的作用和诊断意义。

〔3〕血小板功能的研究：

ÝÝÝ FCM 可检测血小板膜抗原，如CD41a、CD42b、CD36、CD62p、CD63 等。应用流式细

胞术检测这些单克隆抗体的变化可用于：

ÝÝÝ a、评价血小板功能状态;

ÝÝÝ b、探测循环血液中激活的血小板;

ÝÝÝ c、探测血小板自身抗体。

ÝÝÝ 如对原发性血小板减少性紫癜、慢粒急变和再障病人的血小板自身抗体的检测中发

现，病人均可探测到 IgM型自身抗体，有的病人可同时伴有 IgM或IgA 自身抗体，后者血

小板减少更明显。因此，IgG 血小板免疫荧光检查是检测自身免疫反响的敏感和特异指标，

它可直接测定自身免疫性血小板减少病人的血小板外表免疫球蛋白，进行血小板交叉配型，

以此为有自身免疫反响的病人选择适宜的供血者。

〔二〕正常骨髓各系血细胞特点的研究

ÝÝÝ 1．造血干细胞的特点：

ÝÝÝ FCM 多参数分析可以探测常规形态检查方法不能确认的造血干细胞。

ÝÝÝ 2．红细胞系统的特点：

ÝÝÝ FCM 系统地观察了红系统外表特异性抗原〔Hle-1、CD71 和 GlycophorinÝ A〕核

酸及红细胞体积的变化来研究红系在正常骨髓分化成熟的规律。GlycophorinÝ A 常作为

红细胞晚期的特征，出现在有核红细胞，此时可与体积相似的淋巴细胞进行鉴别，

GlycophorinÝ A在成熟红细胞到达最大值，不再随红细胞的成熟而变化。CD71 表达介于

Hle-1 和 GlycophorinÝ A 之间，在 GlycophorinÝ A出现之前，到达最大值。Hle-1 主要

表达在最早期可鉴别的红细胞上，随着红细胞的成熟而逐渐减少，红系随着成熟细胞体积

逐渐减少的物理特点，可由 FCM 的前向散射光来测得。另外，在 CD71 和 GlycophorinÝ A

成熟红细胞中，DNA 含量逐渐减少，以至只含有 RNA，失去 CD71 成为成熟红细胞。

ÝÝÝ 3.粒细胞的特点

ÝÝ 〔1〕区别正常粒细胞和白血病克隆；

ÝÝ 〔2〕确定白血病是以粒系为主，还是以单核细胞为主；

ÝÝ 〔3〕探测粒细胞白血病的异质性。

ÝÝÝ 4.巨核细胞的特点

ÝÝÝ 应用 FCM 同时观察巨核细胞的体积，内部结构，DNA 含量以及膜外表抗原在细胞分

化成熟中的变化。

ÝÝÝ 5.正常骨髓B细胞的分化和成熟

ÝÝÝ Ⅰ期：CD19、CD34、HLA-DR、TdT、CD10、Ig基因重排

ÝÝÝ Ⅱ期：失掉 CD34、核TdT，CD10 减弱，HLA-DR 强度增加 4 倍，

ÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝÝ 同时表达 HLA-DP 和 CD45Ý

、CD19ÝÝÝÝÝÝÝÝÝ

ÝÝÝ Ⅲ期：CD20、HLA-DQ、SigM、CD19

ÝÝÝ Ⅳ期：CD19、CD21、CD22，不表达 CD10

ÝÝÝ 6.正常骨髓浆细胞的特点

ÝÝÝ 两群：一群体积较小，表达 CD22、CD35 和SigE，是早期浆细胞。

ÝÝÝ 另一群体积较大，膜抗原表达有明显异质性。

ÝÝÝ 7.正常骨髓细胞 DNA 含量与细胞表型

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摘要：

髓过氧化物酶（MPO）由重链和轻链组成储藏于中性粒细胞中能催化生成强氧化剂次氯酸在炎症反应中作为中性粒细胞活性的指标。MPO与心血管疾病密切相关影响粥样斑块稳定性及血栓形成被认为是影响斑块稳定性的重要因素还可作为预测急性冠脉综合症的指标。血浆MPO水平可独立预测心血管疾病的危险性对于经典检测排除心梗的患者检测MPO水平仍可预测心梗等心血管疾病的危险性。流式细胞术（FCM）在血液学中有多种应用如血细胞计数和分类、白血病分类和细胞动力学研究等可预测化疗效果和微小残留病变。此外FCM还可用于分选造血细胞、检测白血病基因产物表达和细胞凋亡等。在器官和骨髓移植方面FCM可进行交叉配型、监测肿瘤细胞等。在免疫血液病方面FCM可定量测定细胞膜上免疫球蛋白等协助疾病诊断。

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