免疫组化实验报告

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免疫组化实验报告

一、仪器与试剂

1.仪器：

包理机：KD-BM 生物组织包埋机，浙江省金华市科迪仪器设备有限公司；

切片机：LEICA2016，德国；

水浴锅：SHA-C，江苏金坛市荣华仪器制造有限公司；

图像采集:采用OLYMPUS BX-41荧光显微镜及NIKON DIGITAL SIGHT 彩色CCD；

数据分析软件:Image Pro Plus6.0 (Media Cyberne)cs公司；

2.试剂：

免疫组化染色试剂盒: Histostain-Plus Mouse Primary (Cat. No. 85-6643, Invitrogen, USA)

Histostain-Plus Rabbit Primary(Cat. No. 85-6743, Invitrogen, USA)

试剂A （蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液

试剂B （黄色液体）：生物素化二抗工作液

试剂C （橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液

DAB Kit (Cat. No. 00-2014, Invitrogen, USA)

二、石蜡包埋法

1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上，其

下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。

2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右

手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。

3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有

气泡。

4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一

层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。

5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。

二．石蜡包埋的注意事项

1: 取材和固定：根据客户要求将切取3mm大小的组织块。

2: 脱水和透明：

８０％酒精（min）

９５％酒精Ⅰ（min）

９５％酒精Ⅱ（min）

无水酒精Ⅰ（min）

无水酒精Ⅱ（min）二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min）

<2mm 45-60 45-60 45-60 15-30

2-4mm 60-120 60-120 60-120 30

4-5mm 120-240 120-240 120-240 60

3：浸蜡和包埋：

浸蜡：将透明的组织放入蜡杯（Ⅰ）→蜡杯（Ⅱ）→蜡杯（Ⅲ），一般总的浸蜡时间

为２－４小时左右。:

4：包埋：

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摘要：

免疫组化实验报告摘要：本实验使用KDBM生物组织包埋机、LEICA2016切片机等仪器以及HistostainPlus免疫组化染色试剂盒等试剂进行。实验采用石蜡包埋法具体步骤包括：将组织浸入石蜡后移入包埋用石蜡杯点燃酒精灯保持石蜡溶解；准备包埋框加热镊子防止粘蜡；左手持蜡杯右手将加热的镊子放在蜡口让石蜡注入包埋框；迅速镊取组织块放入包埋框内石蜡保证切面朝下并压平；在石蜡表面凝固前贴上标签注意勿混淆；蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时浸入冷水冷却；蜡块硬固后修切准备制成切片或储藏。实验注意事项包括：取材固定时切取3mm大小组织块；脱水和透明时需依次经过不同浓度酒精和二甲苯处理。

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