γ-氨基丁酸及其A型受体在胃癌SGC-7901细胞的表达及对细

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γ-氨基丁酸及其 A型受体在胃癌 SGC-7901 细胞的表达及对

细胞增殖的影响

史良会 1,2 张才全 1*

(400016 重庆，重庆医科大学附属第一医院胃肠外科 1， 241001 安徽芜湖，皖南医学院弋矶山医院普外

科2)

【摘要】：目的观察 GABA，GAD65，GABRP 在胃癌 SGC-7901 细胞中的表达及对

细胞增殖、周期分布的影响。方法 RT-PCR、IF 及 Western Blot 检测胃癌细胞

SGC-7901 中 GABA、GAD65 及 GABRP mRNA 及蛋白表达；1μM ，10μM，100μM

GABA，0.5μM,5μM,50μM Muscimol，0.5μM,5μM,50μM Bicucullin 分别作

用于胃癌细胞 SGC-7901 48h 后，新型四唑氮盐（MTS）比色法检测细胞增殖情

况，流式细胞仪检测细胞周期分布情况。结果 GAD65，GABRP mRNA 及蛋白表达

均于 SGC-7901 细胞中；GABA，GABRP 及 GAD65 蛋白定位于 SGC-7901 细胞胞膜胞

浆；与空白组比较，1μM GABA，5μM 及 50μM Muscimol 作用 SGC-7901 细胞

48h 后，细胞生长的增殖率上升，5μM，50μM Bicucullin 作用 SGC-7901 细胞

48h 后，细胞生长抑制率上升；1μM GABA 可导致细胞 G0/G1数量的减少，G2/M

期数量的增加；3 个浓度的 Muscimol 可导致 G0/G1期数量的减少，5μM、50μM

Muscimol 可导致细胞 G2/M 期数量增加；5μM，50μM Bicucullin 可导致 G2/M

期数量的减少，（

＜0.05）。结论 GABA 及其 A 受体在 SGC-7901 细胞中的表达

可能促进细胞增殖，扰乱细胞周期进程，促使细胞分裂。

【关键词】：胃癌；γ-氨基丁酸；增殖；细胞周期

Influence of the expression of GABA and GABRP in gastric cancer

SGC-7901 cells on cell migration ability

Shi Lianghui1, 2 Zhang Caiquan1

(1Department of Gastrointestinal Surgery, the First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing

400016,China;2Yijishan Hospital of Wannan Medical College, Wuhu 241000,china)

[Abstract]: Objective To investigate the expression of GABA, GAD65 and GABRP

in SGC-7901 cells and the effects of cell proliferation, cell cycle. Methods RT-PCR,

Western Blot and IF were used to detect the expression GABA, GAD65 and GABRP

in gastric cancer cells SGC-7901. SGC-7901 cells were cultured for 48h with 1μM

，10μM ，100μM GABA ，0.5μM,5μM,50μM Muscimol ，0.5μM,5μM,50μM

Bicucullin concentrations of GABA, Muscimol and Bicucullin. MTS assay was used

to examine cell proliferation. Flow cytometry was used to analyses cell cycle

distribution. Results The mRNA and protein of GABA, GAD65 and GABRP were all

expressed in SGC-7901 cells. GABA, GAD65 and GABRP protein level were

predominantly localized on the cell cytoplasm of SGC-7901. Compared with blank

group, the cells proliferation were obviously stimulated in 1 μM GABA, 5μM and

50μM Muscimol groups, but significantly inhibited in 5μM ，50μM Bicucullin

groups. Flow cytometry analysis showed that the percentage of cells in G0/G1 phase

decreased while the number of cells in G2/M phase increased in 1 μM GABA group.

Different concentrations of Muscimol reduced G0/G1 phase cell percentage, but both

of 5μM and 50μM concentrations of Muscimol elevated G2/M phase cell percentage.

In 5μM，50μM Bicucullin groups, the percentage of G2/M phase cell were reduced,

(P＜0.05). Conclusion Higher expression of GABA and GABRP in SGC-7901 cells

may promote cell proliferation, disturb cell cycle proceeding, and accelerate cell division.

[Keywords]：gastric cancer； γ- aminobutyric acid； Proliferation； Cell cycle

中图分类号：R753.2 文献标识码：A

前言

γ-氨基丁酸（γ- aminobutyric acid, GABA）是哺乳动物中枢神经系统最重

要的抑制性神经递质，它主要由谷氨酸经 L- 谷氨酸脱羧酶（L-glutamate

decarboxylase, GAD）的脱羧作用生成。GAD65 和GAD67 是合成 GABA 的主要

限速酶。现已明确，GABA 存在于哺乳动物多种外周组织，并扮演了除了神经

传导及神经调节外的多种功能[1]。近年来的研究表明，GABA 与GABA 受体

（GABA receptor, GABAR）还高表达于多种肿瘤组织，通过 MAPKs 等信号转

导途径调控肿瘤增殖及侵袭转移，从而参与肿瘤的发生发展[2]。文献报道[3]，在

胃癌组织中，GABA 的表达及其合成酶 GAD 的活性均明显高于正常组织。因此

本文探讨在胃癌细胞中，GABA 及其 A受体（GABAAR）的表达是否参与了胃

癌细胞的增殖及细胞周期的调控。

1材料与方法

1.1 主要材料和试剂

1.1.1 菌株人胃腺癌细胞株SGC-7901 购自中科院上海细胞库。

1.1.2 正常脑组织正常脑组织取自脑外伤后早期清创，并获得患者知情同意书，

整个实验过程遵循医学伦理学的原则。

1.1.3 主要试剂 RT-PCR 试剂盒，MTS 购于Promega 公司，兔多抗

GABA，GAD65 抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，兔多抗π-GABAAR抗

体购自 Santa Cruze ，FITC 兔抗羊二抗购自北京中山生物技术有限公司，

GABA、GABAAR激动剂Muscimol 、GABAAR拮抗剂 Bicucullin 均购自

Sigma，Western Blot 相关试剂购自碧云天公司。

1.1.4 引物设计与合成根据 GenBank 发布的 GABRP [Gamma-aminobutyric acid

（GABA） A receptor, pi] ，GAD65[glutamate decarboxylase 2 (brain, 65kDa) ，

（GAD65）]，GAPDH 编码区序列，采用Primer Premier 5.0 设计引物，送于上

海生工合成。GABRP ，NM_014211.2 ，上游引物： 5'

GAGGGAACGACTCTGTGCG 3'，下游引物： 5' CTGCCATCTGCTGTAAGGA

3' ，扩增产物为429bp ；GAD65 ，M81882.1 ，上游引物： 5'

CCTCCTACCTCTTTCAGCA 3' ，下游引物： 5' TTCCCATCAAACACCATCT

3' ，扩增产物为226bp ；GAPDH ，NM_002046.3 ，上游引物： 5'

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标签： #胃癌

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γ-氨基丁酸及其A型受体在胃癌SGC-7901细胞的表达及对细胞增殖的影响史良会1,2张才全1*(400016重庆，重庆医科大学附属第一医院胃肠外科1，241001安徽芜湖，皖南医学院弋矶山医院普外科2)【摘要】：目的观察GABA，GAD65，GABRP在胃癌SGC-7901细胞中的表达及对细胞增殖、周期分布的影响。方法RT-PCR、IF及WesternBlot检测胃癌细胞SGC-7901中GABA、GAD65及GABRPmRNA及蛋白表达；1μM，10μM，100μMGABA，0.5μM,5μM,50μMMuscimol，0.5μM,5μM,50μMBicucullin分别作用于胃癌细胞SG...

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