2020新冠病毒核酸检测标准操作流程

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2020 新冠病毒核酸检测标准操作流程
在当前新型冠状病毒肺炎疫情期间,需要开展核酸检测的医疗
机构,在有限的硬件条件下,如何科学、规范、有效地做好生物安
全防护及开展核酸检测工作。各实验室可结合自身条件和流程,制
定适宜的生物安全防护和核酸检测方案。
核酸检测流程
(一)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿
戴)
穿戴流程:
在基因扩增实验室的清洁区(更衣区)或者普通实验室的洁净
区,工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医用 N95 口罩、一次
性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手
套,进入样本处理工作区域或实验室。
【要点提示】
具备标准基因扩增布局条件的实验室,应在清洁更衣区做好个人
三级防护,条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程
穿戴好个人三级防护。
需佩戴医用 N95 口罩,若无医用 N95 口罩,可以考虑用普通
N95/KN95 口罩外加一次性外科口罩的组合方式,但不要佩戴有呼
吸阀的 N95 口罩。
佩戴 N95 口罩时需检查密闭性,通过双手按压、深呼吸、左右
转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求,有条件
时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣,穿衣时需由他人协助。
穿戴整齐的工作人员,应按要求尽快进入样本处理的实验区域开
展工作,严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
(二)样本的灭活处理
操作流程:
两名完成三级防护的工作人员,进入样本处理区或样本处理专
用实验室,将接收到的样本二级包装在安全柜内打开,检查样本主
容器是否为严格密闭;对密封袋表面进行消毒后,对送检样本进行
56℃30 分钟的灭活,灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最
内层的容器,将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。
【要点提示】
涉及高致病性病原微生物的实验室活动,需由两名工作人员完成,
其中一人负责主要实验操作,一人提供必要的协助。主操作者应避
免反复多次进出安全柜。
灭活式:可以用水空气热形式完成灭活,空气
时可适当延长灭活时间。有条件时可以化设备在安全柜
内操作,减少样本进出安全柜的次。灭活前的样本严禁在生物安
全柜外打开和操作。
特别检查样管是否拧紧、有无样本溢漏等情
样本管次进出安全柜需对外表面进行消毒。
就近配备适的消毒处理物,以防实验操作过程中可能发
生的溢洒事故,有条件时建议在安全柜内备一次性吸水布。
(三)样本的核酸提取
1、手工核酸提取操作流程(以凯杰52906 核酸提取
试剂盒
1裂解制:在基因扩增实验室的试剂配制区或单独
普通试剂配制实验室中,准备核酸提取需的1AW1)、
2AW2)和 carrier RNA。按要求,分别向洗12
中加入分子生物学级130ml 160ml 的无水乙醇并及时做好
;取 310μl 洗脱液(AVE溶解 310μg/Carrier RNA
配置好后,通过传递窗进入核酸提取区或由工作人员送入核酸提取
专用实验室。
2)样本裂解560μl AVL 裂解液到 1.5ml EP 管中,
加入 5.6μl 制好的 Carrier RNA,再加入已灭活的 140μl 样本
拭子、血浆等),混匀振荡 15 ,室温静置 10 分钟,
裂解样本中的核酸。将 EP 时离后加入 560μl 无水乙醇
分混匀 15 ,再次时离后备用。吸取 630μl 裂解产物,
加入心柱中,8000rpm(或 6000g)离1分钟,转
心柱至新收管,将剩余 630μl 裂解产物加到离心柱中,
摘要:

2020年新冠疫情期间医疗机构需科学、规范开展核酸检测及生物安全防护。核酸检测流程要点如下:1核酸检测前的生物安全防护:工作人员在清洁区按顺序穿戴三级防护装备包括一次性帽子、医用N95口罩等具备标准基因扩增布局条件的实验室应在清洁更衣区做好个人三级防护条件有限的实验室可选择在洁净的实验室中按流程穿戴。2样本的灭活处理:两名完成三级防护的工作人员将样本二级包装在安全柜内打开消毒后56下30分钟灭活期间注意检查采样管避免样本溢漏。3样本的核酸提取:包括手工提取(以凯杰试剂盒为例详细介绍裂解液配制、样本裂解、核酸洗涤、洗脱回收步骤)和仪器提取(根据说明书操作)。4PCR体系配制和模板加样:在试剂配制区配制PCR体系分装到反应管后加样每批次做阳性对照和3个阴性对照。5上机检测及结果分析:专人取出PCR检测管上机检测分析结果时结合阴性质控综合判读。6检测后的消毒处理:包括生物安全柜、实验室、工作人员三级防护摘脱后的消毒以及新型冠状病毒相关医疗垃圾的高压灭菌处理。

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