丙型肝炎病毒(HCV)核酸定量检测标准操作规程(PCR-荧光探针法)

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丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）

目的：规范（）检测操作流程，保证检测结果的准确性。

应用范围：荧光定量检测。

职责

文件编写：实验室技术员。

文件审核：实验室主管。

文件审批：实验室主任。

执行：实验室所有工作人员。

参考文献：

中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（荧光探针法）说明书。

中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统型使用说明书。

内容：

检测方法：荧光探针法

实验原理：用一对丙型肝炎病毒特异性引物和一条丙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以逆转录液、

逆转录酶、反应液、耐热聚合酶（酶）、四种核苷酸单体（）等成分，先将逆

转录成，再通过体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行扩增，并对全

过程进行实时监测从而检测丙型肝炎病毒。主要用于病毒感染的辅助诊断及其疗效监测的标

准。

性能参数：

精密度：检测下限为 !"#。

线性范围：～$ !"#。

标本采集：

使用标本类型：血清。

标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集，采集后及时分离出血清在～$%条件下保存。用

一次性无菌注射器抽取受检者静脉血"#，注入无菌的干燥玻璃管，室温（～%）放置～

"&，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，'"离心"&；吸取上层血

清，转移至"#灭菌离心管。

标本保存和运送：分离后的血清在～$%条件下保存应不超过小时，%可保存个月，要

长期保存的需分装后储存于%。应避免反复冻融。标本运送采用%冰壶。

标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。

设备和试剂：

设备：荧光定量仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混

匀器、干式恒温器、冰箱（%、%）、移动!固定紫外灯、冷冻离心机。

试剂：

试剂品牌：中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（荧光探针法）

试剂批准文号：国药准字 第号。

试剂组成：

组分名称规格数量主要成分

核酸提取试剂

提取液 ()!管二氧化硅、*水

提取液+ ")!管 ,-.、'

)、*、'/&

*0 "#!瓶 *

扩增试剂

内标溶液 ()!管含内标片段的病毒样颗粒及稳定剂

反应液 ()!管引物、探针、'盐酸+-1 '

反应液+ ()!管 酶、逆转录酶、&

质控品

阴性质控品 ()!管阴性血浆

强阳性质控品 ()!管 阳性血浆

临界阳性质控

品

()!管 阳性血浆

试剂保存和有效期：保存于2%；有效期3个月。

配套提取试剂盒组成：

组分名称规格数量

离心柱个!包

收集管 $个!包

裂解液"#!瓶

抑制物去除液（浓缩液） "#!瓶

去离子液（浓缩液） "#!瓶

洗脱液"#!瓶

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标签： #肝炎

摘要：

《丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR荧光探针法）》摘要1目的与应用范围：规范HCVRNA（PCR）检测操作确保结果准确适用于HCVRNA荧光定量检测。2职责：技术员编写文件主管审核主任审批PCR实验室人员执行。3内容：检测方法：PCR荧光探针法先将RNA逆转录成cDNA再通过PCR体外扩增DNA实时监测用于HCV感染辅助诊断及疗效监测。性能参数：检测下限10x10copiesml线性范围10x1010x10copiesml。标本采集：用血清合作单位按要求采集后及时分离血清28保存不超72小时20可存1个月长期保存分装后于70储存避免反复冻融运送用0冰壶污染、溶血等标本拒收。设备与试剂：设备含DA7600荧光定量PCR仪等；试剂用中山大学达安基因股份有限公司产品保存于25有效期9个月。操作过程：待测样本与质控品同步处理包括实验前准备、RNA提取、排版、加样、DA7600设置及结果分析、记录数据、处理扩增产物、关闭电源等。注意事项：避免污染RNA提取建议冰上操作试剂用前解冻且避免反复冻融等。安全防护：试剂处理、仪器使用、生物安全防护均有相应要求。4相关记录表格：包含实验

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