乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程

2025-10-24 999+ 31.5KB 4 页海报

侵权投诉

乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）

1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。

2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。

3.职责:

3.1 文件编写：实验室技术员。

3.2 文件审核：实验室主管。

3.3 文件审批：实验室主任。

3.4 执行：PCR 实验室所有工作人员。

4. 参考文献：

4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说

明书。

4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。

5. 内容：

5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。

5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应

液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、

低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。

5.3 性能参数：

5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。

5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。

5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集

5.4.1 标本类型：血清。

5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～

25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离

心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。

5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。

5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。

5.5 设备和试剂：

5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混

匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。

5.5.2 试剂：

5.5.2.1 试剂品牌：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

5.5.2.2 试剂批准文号：国食药监械（准）字2014第3400032号。

5.5.2.3 试剂组成：

组分名称规格数量

核酸提取试剂 DNA提取液I 4.5ml/瓶2

质控品及阳性定量参考品

阳性质控品250ul/管1

HBV强阳性质控品250ul/管1

HBV临界阳性质控品250ul/管1

HBV阳性定量参考品（2.0×106IU/ml）250ul/管1

HBV阳性定量参考品（2.0×105IU/ml）250ul/管1

HBV阳性定量参考品（2.0×104IU/ml）250ul/管1

HBV阳性定量参考品（2.0×103IU/ml）250ul/管1

PCR检测试剂

HBV内标溶液 100ul/管1

HBV-PCR反应管 1人份/管20

5.5.2.4 试剂保存和有效期：保存于-20±5oC；有效期9个月。

5.5.2.6 质控品：由康切斯坦购买质控品。质控水平S4。

5.6 操作过程：

5.6.1 血清标本与质控品的处理：待测样本、阳性定量参考品、阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV

临界阳性质控品进行同步处理。

5.6.1.1 打开恒温水浴箱或干式恒温器，设定温度100℃。

5.6.1.2从试剂盒中取出DNA提取液I、内标溶液、阴性质控品、HBV阳性定量参考品。从冰箱取出阳性

质控品，让其在室温下完全融化。

5.6.1.3 取450ul DNA提取液I和4ul内标溶液，分别加到1.5ml的灭菌离心管中并编号。

5.6.1.4 将DNA提取液I、阴性质控品于振荡混匀器振荡5s，6,000rpm离心5s。

5.6.1.5 往装有450ul DNA提取液I和内标溶液的灭菌离心管中加入待测样本血清和阳性质控品各

200ul，用振荡器剧烈振荡混匀15s，瞬时离心数秒。100℃恒温处理10min。

5.6.1.6 12,000rpm离心5min,2～8℃保存备用（如需长期保存请放置-20℃）。

文档加载中……请稍候！
如果长时间未打开，您也可以点击刷新试试。

下载文档到电脑，查找使用更方便

立即下载

标签： #肝炎

摘要：

《乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR荧光探针法）》摘要1目的与范围：规范HBV核酸定量检测操作保证结果准确性适用于HBVDNA荧光定量检测。2职责：文件编写、审核、审批分别由实验室技术员、主管、主任负责PCR实验室所有工作人员执行。3内容：检测方法：PCR荧光探针法通过PCR体外扩增DNA并实时监测。性能参数：精密度检测下限为50x10IUml线性范围10x1010x10IUml。标本采集：血清标本采集后室温放置或离心取血清可20保存6个月运送用0冰壶拒收污染等标本。设备试剂：使用DA7600荧光定量PCR仪等设备试剂盒有明确批准文号、组成、保存和有效期。操作过程：包括标本与质控品处理、加样、仪器操作与结果分析等。4干扰反应与防护：溶血致结果升高某些药物致结果降低；安全防护包括试剂、仪器、生物安全等方面。5注意事项与记录：实验避免反复开盖、试剂反复冻融等；有相关记录表格。

展开>> 收起<<

乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程.doc

共4页,预览2页

还剩页未读，继续阅读