单味中药对子宫肌瘤之实验研究

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单味中药对子宫肌瘤之实验研究

【关键词】 吴茱萸

 【摘要】 目的 观察单味中药对子宫肌瘤之影响。方法 应用

terazolium (MTT)反应法, 针对传统中药以 50%乙醇之萃取物进行子宫肌瘤细

胞生长抑制试验。结果 发现 20 种单味中药 (吴茱萸, 王不留行 , 水蛭等)对

子宫肌瘤细胞抑制率较正常子宫细胞明显增高。结论 子宫肌瘤细胞半致死量

浓度(IC50)之测定,较正常子宫细胞为低, 显示这些中药对子宫肌瘤细胞较为敏

感, 应可经由细胞凋亡的途径, 而抑制子宫肌瘤细胞生长。

　　【关键词】 王不留行；吴茱萸；水蛭；生黄芪；子宫肌瘤细胞；细胞凋

亡



　　Effects of Chinese herb on myoma

　　【Abstract】 By observe in our thaditional Chinese Herbs cure

Myoma of the uterus repress growing  Use of tetrazolium (MTT) in

our traditional Chinese 50%alcohol natural prod ucts repreess growing

test those herbs are more effective in repress Myoma  We found 20

kinds of Chinese Herbs ( Evodiae Feuctur , Vaccariae Semen ,

Hirudo，etc ) , those herbs are more effective in repress Myoma cell

than normal Myoma  We conclude that Di-Darg Tang and Vaccaria seed

is well tolerated , safe ,and effective ; The test shows that those

herbs are more sensitive on Myoma cell , Bcl-2 protein can repress

Myoma cell by apoptosis.

　　【Key words】 vaccariae semen;evodiae feuctus;hirudo;astragali

radix;myoma cell;apoptosis

 子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤,由平滑肌纤维和结缔组织组成,所

以临床上又称子宫纤维瘤。子宫肌瘤好发于 20～50 岁的妇女,其中年龄＞40 岁

的妇女约有 50%患有子宫肌瘤,但 Cramer 和 Patel 经尸体解剖 (autopsy)的统

计后认为子宫肌瘤的发生率高达 75%［1］。

　　对于一个不需再生育的妇女而言,全子宫切除(totalhystectomy)是治疗子

宫肌瘤的方法之一,然而台湾地区子宫切除术是否有过于泛滥的情形常受质疑。

有研究指出台湾地区子宫切除率以台北、台中、高雄为高。变异大多可由医疗资

源分布解释,而子宫切除年龄最高分布在 40～44 岁占%。除癌细胞病变外,以生殖

器脱垂的病变为最高,这可以由医疗不适当性解释［2］。因而子宫切除的适当性

除须由专家审视外,如果能有更多其他替代疗法,也是对妇女的一种保障。

　　子宫肌瘤真正形成的原因,至今尚不清楚,但有不少研究认为雌激素

(estrogen )与黄体素(progesterone )与子宫肌瘤的生长有密切关系,这些激素

又必须透过生长因子(growth factor )才能运作［3］，而人绒毛膜促性腺激素

(human，HCG )也能调节生长。黄体素可刺激子宫肌瘤上皮生长因子(epidermal

growh factor )产生，造成子宫肌瘤的增生和分化。子宫肌瘤虽然是由单一的细

胞突变开始,而雌激素可增加雌激素接受体(estrogen receptor, ER )与黄体素

受体(progsterone receptor,PR )也可促进子宫肌瘤的增生。黄体素则对突变的

正常子宫细胞有加速分裂和增生的作用［4］。

 性腺激素释放激素强化物 (GnRHa)是经由降低GnRH接受体而使性腺分

泌减少,进而使卵巢分泌雌激素和黄体素减少,而抑制子宫肌瘤生长［5］。根据

国内研究,GnRHa 在连续注射到 12 周时,达到最大的疗效,大部分的子宫肌瘤会

缩小为原来的一半。缩小的百分比和未结合 PR浓度成反比,而和未结合ER关系

不大。因此 GnRHa 可缩小子宫肌瘤,部分取决于子宫肌瘤上未结合性激素接受体

浓度所影响［6］。

　　子宫肌瘤属于中医医学“积聚”“瘕”范围,瘕是泛指腹腔内的有形肿块

而言,所谓者,是指腹腔内有形的肿块,有一定的部位,属血病。所谓瘕者,是指腹

腔内无形的气块,无一定的部位,属气病。《内经・灵枢・水胀篇》谓;“石瘕生于

胞中,寒气客于子门,子门闭塞,气不得通,恶血当泻不泻,以留止,日益以大,状如

怀子,月事不以时下,皆生于女子,可导而下”。《校注妇人良方》谓“妇人腹中瘀

者,由月经闭积,或产后血未尽,或风寒滞瘀,久而不消,则为积聚瘕矣”。因此中

医认为,六淫之邪,七情内伤,引起脏腑功能失调,气血不合,以致气滞血瘀,新血

与旧血凝聚成块,结于胞室,日益长大而成子宫肌瘤。

　　子宫肌瘤临床表现为月经过多,经期延长,周期缩短,或不规则子宫出血,常

会伴有不同程度的贫血。中医认为,脏腑不合,气滞血瘀,冲任失调是本病的主要

原因,临床上可以辨证分型治疗。本病是以子宫出血为主要临床症状,病久失血,

而导致气血两虚,在治疗时,除出血期以化瘀止血、平时破瘀消外,还必须结合补

益气血。对于瘕的治法,《内经》提出“坚者削之,结者散之,留者攻之,滞者导

之”的原则;《女科经纶》：“善治瘕者,调其气而破其血,消其食而豁其痰,衰其

大半而止”。

　　汉方医学已有数千年之历史,而且是累积经验的循证疗法之一,由于化学药

物引起的药害,以及食品添加物或清洁剂引起的公害等,引起人们对利用自然药

物的兴趣,纷纷把目光转向天然中药。依据汉方的思想,绝大多数的妇女疾病是属

于体内“血”的异常,中医所谓的“血”,不单是指血液,也包括淋巴液或激素作

用。中医对女性的生理及病理独具慧眼,其用药经验可以说是数千年来累积而成。

　　中药的运用是几千年来前人智慧结晶所在,其内容相当丰富且千变万化。从

《内经》、《伤寒论》始,前人从药物的升降浮沉,四气五味,虚实补泻,脏腑归经,针

对人体阴阳表里,寒热虚实,把数百种药物归纳,依据理论用于临床。

　　本研究已建立细胞模式,以期能从天然产物中找出明确具有治疗子宫肌瘤

之中药,为医师临床用药提供参考,造福更多的妇女。

1 实验材料

　　 中药材来源 本项研究所测试的中药材来自台北南京泰生堂参药有限

公司,实验中药材见表1。

　　表1 单味药材50%酒精之萃取率　略

　　 仪器 (1)回转式真空减压浓缩机 (Switzerland BUCHIRE 111 );(2)

离心机 Centrifuge 5415C (Eppendorf );(3)冷冻干燥机(Eyela; Cool );(4)

微量电子天秤(Shimazu, Libror ACF-200 )；(5)显微镜(Olympus, Tokyo )；

(6)二氧化碳培养箱(Espec BNA-211 )；(7)血细胞计数器(Hemocytometer;

Bright-line )；(8)组织培养角瓶(Corning )；(9)组织培养皿(Falcon ) ；

(10)96-Well 组织培养盘(Corning )；(11)微量吸管(Biohit )；(12)高温灭菌

器(Tomin 1 Medical Equipmene Co,LTD; TM-325)；(13)过滤膜(Coming )；

(14)-80℃冰箱(Enviromental Equip. Co; So-Low )。

　　 子宫肌瘤细胞 由荣民医院妇产科提供病理检体。当患者在妇产科门

诊,以内诊与超声波扫描确诊为子宫肌瘤,依临床路径安排入院手术治病者,以做

本研究之素材。即由此类患者在手术切除后,立即切取肌瘤组织,放入转输液

(DMEM)中,送实验室做组织培养。

　　 试药与试剂

　　 培养液 （1）DMEM (Dulbecco’s Minimum Essential Medium ) ；

（2）Fetal Bovine Serum (Hyclone: Cat )；（3）Penicillin-

Strepetomycin (Seromed: Cat No. 03-033-1B )；（4）L-Glutamine

(Seromed: Cat )；（5）NAA (Mem-Eagle Non-essential Amino Acids

Solution )；（6）L-Glutamine 200 mM (Gibco: Cat No. 25930-081) 。

　　 染色剂 （1）Trypan blue (Sigma )；（2）MTT: {3(4,5-

dimethylthiazoled 1-2-y1)-2,5-dipheyl tetrasolium bromide }

(Boehringer Mannheim GmbK Cat No. 1465 007 )。

　　 一般化学药品 （1）DMSO (Merck, Germany, K251931, Max %

H2O )；（2）Sodium Hydrogen Carbonate ( Merck, Germany,NaHCO3; Pro

analysis )；（3）Isopropanol (Merck, Germany )。

　　 测试药品与酵素 （1）B-Estradiol (Sigma USA )E-2758 Lot

79H0941；（2）Progesteronl (Sigma USA )P-8783 Lot 80K0885；

（3）Trypsin, % (Sigma USA )Lot 1077108；（4）Trypsin-EDTA (Sigma USA

)Lot 1089908 ；（5）LSAB(Dako, Denmark, Code No. K0675 )；

（6）Monoclonal Anti-Human Progesterone receptors(Dako, Denmark,

clone pgR 636, 1:50 )。

　　2 实验方法

　　 单味药之制备 将单味药经粉碎后,加十倍重量之 50%酒精, 60℃水

浴回流抽取 2h,趁热过滤。同法两次后合并滤液经减压浓缩制约 1/10 体积量。

经冷冻干燥得粉末状浓缩物,其产率见表1 所示,将冷冻粉末置于 20℃冰柜中以

备下列实验使用。

　　 一般溶液之配制

　　 PBS (phosphate buffer solution )之配制 将KCl ， NaCl ，

NaH2PO4・及KH2PO4 溶于次蒸馏 500ml 中,高压减菌后使用。

　　 MTT 配制方法 称取 MTT 5mg 溶于 10ml 成浓度 500μm,制完全溶解后

以μm 之过滤膜过滤。

　　 检测药物之制备 实验前将冷冻干燥之各种药品精称 10mg,以 1ml

DMSO 溶解,再用研钵细磨后,以 μm microfilter unit 过滤,分别调制成浓度为

10mg/ml 之 stock solution。每次检测时,加入2μl stock solution 于每孔含

198μl培养液中,使最后单位药之浓度 100μg/ml。

　　 试验细胞之制备

　　 子宫肌瘤和正常子宫组织 从荣民医院手术室取出后,置于含DMEM 的

试管中,以冰块冷冻带回实验室,于 1h 内切碎进行组织培养。

 子宫肌瘤和正常子宫组织 将其分别切成 1mm 之小块,加入/ml

collagenase type Ⅱ和% trypsin 各3ml,于 37℃。4h 后呈黏稠状,用胶吸管打

散细胞(pipetting ),经离心(1200r,4℃,5min)去上清液。加入DMEM,再离心后

去上清液。加入5ml DMEM 均匀分布于培养皿, 2 天换一次培养液,于 5%CO2 37℃

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标签： #子宫肌瘤

摘要：

单味中药对子宫肌瘤之实验研究摘要本研究旨在观察单味中药对子宫肌瘤的影响。研究采用terazoliumMTT反应法对20种传统中药的50乙醇萃取物进行子宫肌瘤细胞生长抑制试验。结果发现吴茱萸、王不留行、水蛭等中药对子宫肌瘤细胞的抑制率显著高于正常子宫细胞。子宫肌瘤细胞半致死量浓度（IC50）的测定结果显示这些中药对子宫肌瘤细胞更为敏感可能通过细胞凋亡途径抑制其生长。子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤好发于2050岁妇女。全子宫切除是治疗手段之一但存在手术泛滥问题需寻找替代疗法。研究认为子宫肌瘤形成与雌激素、黄体素等激素及生长因子密切相关。中医认为其属“积聚”“瘕”范围由脏腑功能失调、气血不合所致。实验材料包括来自台北南京泰生堂参药有限公司的中药材及荣民医院妇产科提供的子宫肌瘤细胞病理检体。通过细胞培养、染色、Bcl2蛋白制备及Westernblot分析等方法测定单味药对子宫肌瘤细胞和正常细胞的毒性百分比及IC50。结果显示王不留行、吴茱萸等中药对子宫肌瘤细胞毒性较高且子宫肌瘤细胞对这些中药更为敏感。研究结论认为药理实验和临床效果可能存在差异需发展改进实验模式。单味药中吴茱萸、王不留行、水蛭等

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