手足口病实验室检测方案

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手足口病实验室检测方案

为规范手足口病的标本采集、运送及实验室检测操作程序，提高检测

准确性，从而为手足口病的明确诊断和相关实验研究提供可靠的依据，特

制定本方案。

手足口病的实验室检测原则和程序

手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本后进行病毒分离和病

毒鉴定，如果没有采到合适的临床标本，或无法进行病毒分离，也可以通

过血清学检测（如中和实验）来检测血清中的中和抗体，或直接从临床标

本中检测病毒的核酸来诊断（见下图：手足口病的实验室诊断流程图）。

一般是由省级病毒实验室进行病毒的分离，爆发疫情范围较大时，国

家参比实验室也可以提供技术支持。病毒分离成功后，送至国家参比实验

室进行鉴定或复核，同时对全国手足口病的病原进行病毒学监测。国家参

比实验室接到标本后，在 30 日内将结果反馈给省级实验室。

很多血清型的肠道病毒能引起手足口病，不同细胞系对不同病毒的敏

感性是有所不同的，而不同时期肠道病毒的流行株也不同。通常用于肠道

病毒分离的细胞系为 RD 细胞（对 CA16 和 EV71 敏感）、HEp-2 细胞（对某

些柯萨奇 B 组病毒敏感）等，联合使用上述两种或更多细胞（如 Vero 细

胞）有助于分离到更多的肠道病毒。

使用血清型特异性的中和抗血清进行的中和实验是肠道病毒鉴定的基

本方法，如果使用了适当的抗血清，实验结果是比较可靠的。因为肠道病

毒包括若干个血清型，通常使用组合抗血清进行鉴定，有些组合抗血清已

经商品化。

当无法进行病毒分离或得不到适用于病毒分离用的标本时，血清学检

测可以为肠道病毒的感染提供一个间接的证据。一般用急性期血清及恢复

期血清的检测结果进行比较，抗体滴度呈四倍或以上增高证明有急性感染。

但是，无症状的肠道病毒感染也是常见的，所以对检测结果的解释要慎重

一些。

为了提高检测速度，也为了辅助中和实验法进行毒株鉴定，最近很多

实验室都使用分子生物学方法。目前，用分子生物学方法对肠道病毒进行

定型还没有统一的标准，而且要根据检测目的选择使用适用的方法。

检测结果的评价

如果从临床标本中分离到肠道病毒，尤其是分离自脑脊液、疱疹液，

那么很可能该病毒就是病因病原。当无法进行病毒分离或未分离到病毒时，

血清学诊断方法可以作为病毒感染的间接证据。对于难以分离到的肠道病

毒，分子生物学方法如 RT-PCR 是很有用的。肠道病毒有时引起无症状感

染，所以实验结果的实际意义应结合临床过程和流行病学资料进行解释。

实验室诊断标准

根据手、足、口等部位典型皮疹即可作出HFMD 临床诊断，流行病学接

触史有助于诊断，临床诊断病例中符合下列之一，即为实验室诊断病例：

1，患者的粪便标本、咽拭子标本中病毒分离阳性率远高于对照人群；

2，肠道病毒型特异性中和抗体滴度≥1∶256；或恢复期血清中肠道病

毒型特异性中和抗体较急性期有 4倍或 4倍以上增高；

3，在病变组织中如疱疹液或脑脊液中分离到病毒；

4，自患者血清、疱疹液或脑脊液等标本中检测到病原体核酸。

一、标本采集对象

标本采集对象是暴发疫情出现时手足口病的临床诊断病例和病例发病

所在社区（村）的临近无病例的社区（村）或托幼机构的5 岁以下的儿童

（作为健康对照人群）。

用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子和疱疹液，如果患者出现神经

系统症状，可以采集脑脊液标本。对于血清学诊断，需要在急性期和恢复

期采集双份血清标本。临床标本在运输和贮存过程中要避免反复冻融，如

果不能确保-20℃的条件，应该在 0~8℃运输和保存。标本应冷冻运输，

运输时要附有必要的信息，如标本编号、发病日期和标本采集日期。

二、标本种类及采集、运送

（一）粪便标本

采集病人发病 7 日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集量

5~8g/份，采集后立即放入无菌采便管内，4℃暂存立即(12h内)送达实

验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。

（二）咽拭子标本

采集病人发病 3 日内的咽拭子标本，用于病原检测。用专用采样棉签，

适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放

入装有 3~5ml 保存液（维持液或生理盐水，推荐使用维持液）的采样管中，

在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。4℃暂存立即

（12h内）送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存

于－70℃冰箱。

（三）血清标本

采集急性期（发病 0~3d）和恢复期（发病 14~30d）双份配对血清用

于抗体检测。静脉采集 3~5ml 全血，置于真空无菌采血管中，自凝后，分

离血清，将血清置于－20℃以下冰箱中冷冻保存。

（四）疱疹液

在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液中分离到病毒具有很高的诊断

价值，可同时采集多个疱疹作为一份标本。先用 75%的酒精对疱疹周围

的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将

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标签： #手足口病

摘要：

手足口病实验室检测方案摘要本方案旨在规范手足口病标本采集、运送及实验室检测提高检测准确性。手足口病实验室检测原则包括病毒分离鉴定和血清学检测。省级病毒实验室负责病毒分离国家参比实验室提供技术支持并鉴定复核同时进行全国病毒学监测。病毒分离常用细胞系为RD细胞、HEp2细胞等联合使用有助于分离更多病毒。中和实验是病毒鉴定基本方法结果可靠。血清学检测在无法进行病毒分离时提供间接证据通过比较急性期和恢复期血清抗体滴度诊断。分子生物学方法可提高检测速度辅助中和实验但肠道病毒定型尚无统一标准。标本采集对象包括临床诊断病例和健康对照人群采集粪便、咽拭子、疱疹液、脑脊液等标本运输贮存需避免反复冻融。实验室检测操作流程包括病毒分离、中和抗体滴度测定和逆转录聚合酶链反应（RTPCR）。生物安全方面临床和现场未知样本检测需在生物安全II级或以上实验室进行涉及病毒分离培养的操作应加强个体防护和环境保护。

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